В настоящее время в России доступны идентификации по наличию известных мутаций около 65% больных муковисцидозом [Иващенко Т.Э., 1992; Потапова О.Ю., 1994]. Диагностическая ценность основных мажорных мутаций в порядке убывания их частоты следующая: delF508 (50%), 3732delA (4,3%), W1282X (2,4%), 394delTT (2,1%); G542X (2,0%) [Иващенко Т.Э., 1992]. Согласно нашим данным [Баранов B.C., 1994], молекулярная диагностика муковисцидоза прямыми методами возможна примерно в 55 - 60% семей. В случае непрямой диагностики используются полиморфные сайты локусов ДНК, расположенные в непосредственной близости (IRP, D7S8, D7S23, МЕТ) или внутри самого гена CFTR - минисателлитные последовательности в интронах 6, 8, 17Ь гена CFTR [Агбангла К. и др., 1992; Chebab F.F. et al., 1991; Morral N. et al., 1991; Zielenski J. et al., 1991; Potapova O. et al., 1994]. При отсутствии мажорных мутаций и информативности по полиморфным сайтам молекулярные исследования могут быть дополнены биохимическим анализом амниотической жидкости на содержание ферментов микроворсинок кишечника плода [Горбунова В.Н. и др., 1989; Баранов B.C. и др., 1991].
Методами направленного мутагенеза (gene targeting) (см. главу 8) в различных лабораториях США и Великобритании осуществлено успешное конструирование трансгенных моделей муковисцидоза на мышах [Clarke L.L., et al., 1992; Colledge W.H. et al., 1992; Dorin J.R. et al., 1992; Snouwaert J.M. et al., 1993]. Выяснены признаки сходства и некоторые межвидовые различия проявления мутации гена CFTR у мышей и человека. Показано, что различные мутации этого гена по-разному реализуются в фенотипе CFTR-дефицитных мышей. Так, в одной из трансгенных линий отмечено преимущественное поражение легких, у других -поджелудочной железы и кишечника. В одной мутантной линии наблюдается гибель большого числа зародышей от причин,.сходных с мекони-альным илеусом. Таким образом, эти линии представляют собой идеальные модели для исследования молекулярных основ патогенеза муковисцидоза, а также для разработки и испытания терапевтических мероприятий, включая генотерапию. Как уже отмечалось в предыдущей главе, программы генотерапии муковисцидоза реализуются по крайней мере в 7 центрах США и двух центрах Западной Европы (Великобритании и Франции). Уже успешно осуществлены не только апробации генно-инженерных конструкций на мутантных культурах клеток и модельных животных, но начаты и успешно проводятся клинические испытания генотерапевтического лечения муковисцидоза на 70 пациентах. Исследования по генотерапии муковисцидоза, начатые в нашей стране, пока проводятся на уровне клеточных культур.
