в эти клетки образуются вирионы, несущие векторную РНК и способные лишь проникать в клетки-мишени, но не размножаться в них. Недостатком этой системы, так же как и других векторных систем на основе вирусов, является возможность контаминации производящей клеточной линии нормальным ретровирусом и получения на этой основе компетентного по репликации вектора. Для предотвращения этого необходимо регулярное тестирование «пакующей» линии клеток. Возможна также контаминация ретровирусного вектора клеточными РНК, некоторые из них могут обратно транскрибироваться и встраиваться в геном трансдуцированных клеток. Последствия такого события могут быть выявлены в экспериментах на животных моделях. Другими серьезными недостатками ретровирусных векторов являются:
¦ их способность переносить генетический материал только в про-лиферирующие клетки;
¦ способность индуцировать мутации при случайной интеграции в геном;
¦ возможность спонтанной активации онкогена;
¦ небольшие размеры переносимой ДНК-вставки - до 8 тыс. п.о.;
¦ сравнительно низкий титр (106-107 на 1 мл) рекомбинантных вирусных частиц, получаемых для трансдукции;
¦ необходимость конструирования соответствующих «пакующих» клонов клеток.
Аденовирусные векторы. В отличие от ретровирусов аденовирусы активно инфицируют неделящиеся клетки, обладают большей потенциальной пакующей способностью (ДНК-вставка более 8 тыс. п.о.), имеют высокий титр - 10" на 1 мл, однако не обеспечивают встраивание чужеродной ДНК в геном трансформированной клетки [Hodgson C.P., 1995]. Использование их перспективно для генокоррекции клеток верхних дыхательных путей, легких и других органов - мозга, печени, мышц, кожи и пр. Они эффективны при доставке аэрозольным способом, что было использовано в первых клинических испытаниях по генотерапии муко-висцидоза [Crystal R.G. et al., 1994]. В аденовирусные векторы также инсертируют маркерные гены - neo, CAT или р-галактозидазный ген (р-Gal) для того, чтобы идентифицировать трансдуцированные клетки. Для конструирования векторов используют дефектные по репликации аденовирусы, которые получают путем вырезания из вирусной ДНК генов, кодируюших белки (Ela, Elb) - так называемые аденовирусные векторы 2-го поколения. В настоящее время создаются аденовирусные векторы 3-го поколения, в которых, помимо генов Ela и Elb, удаляют и регуля-торный ген Е4. Такая конструкция может поддерживаться только в присутствии клеток-помощников (например, в культуре клеток почек человека).
