В качестве лигандов используются специфические белки, такие как трансферрин, эритропоэтин, асиалоглюкопротеин, конъюгированный с альбумином инсулин и некоторые другие, взаимодействующие с клеточными рецепторами и обеспечивающие фиксацию генной конструкции на специфических клетках, т. е. адресную доставку чужеродной ДНК в клетки определенного типа (например, асиалоглюкопротеин - в клетки печени, трансферрин и эритропоэтин - в клетки крови и т. д.). Лиганды ковалентно присоединяются к связывающим и компакти-зующим чужеродную ДНК катионным носителям (полилизину, DEAE-декстрану и др.).
Важными компонентами системы являются аденовирус или его N-концевой фрагмент, выступающие в качестве эффективных фузоген-ных агентов, обеспечивающих выход экзогенной ДНК из эндосом после попадания ее в цитоплазму клеток-мишеней. Адресная доставка и эффективная защита от лизосомальных ферментов обеспечивают высокую трансфекционную способность таких конструкций, их несомненную перспективность для генной терапии in vivo [Hodgson СР., 1995].
Мы уже упоминали о возможности сочетания векторного и физико-химического подхода при конструировании систем для переноса генов в клетки человека. Одна из таких систем основана на использовании фи-ламентного фага fd для трансфекции эпителиальных клеток. Гены fd, кодирующие белки оболочки фага, экспрессируются на его поверхности. В один из них инсертируют последовательность, кодирующую поли-L-лизин. Полилизиновые остатки в составе слитого белка связываются с плазмидной ДНК и удерживают ее на поверхности фага. В другой ген оболочки фага инсертируют последовательность ДНК, кодирующую какой-либо агент, специфически связывающийся с апикальной поверхностью эпителиальных клеток и интернализирующий (обеспечивающий проникновение) фага внутрь клетки. С этой целью были апробированы гены белков патогенных бактерий, поражающих кишечный эпителий -интерналин и инвазии, а также последовательности ДНК, кодирующие пептидные фрагменты вариабельного района моноклональных антител АЫ1. Было показано, что во всех трех случаях достигается адресная доставка и интернализация фага в клетки-мишени, т. е. система успешно функционирует.
