Гемофилия В была использована как модель для выработки стратегии генетического консультирования при моногенных заболеваниях, обладающих выраженной мутационной гетерогенностью [Giannelli F. et al., 1992]. Основой такой стратегии является составление национальных баз данных молекулярных дефектов и специфических методов их диагностики. В частности, основываясь на подобной информации, авторы провели характеристику мутаций в группе из 170 неродственных индивидуумов с гемофилией В шведского и английского происхождения и только в одном случае им не удалось идентифицировать мутацию.
Молекулярная диагностика гемофилии В проводится как непрямыми, так и прямыми методами. Непрямая диагностика основана на анализе методом ПЦР внутригенных полиморфных сайтов: Taql (в положении 11109-11113); инсерционного полиморфизма в интроне А (рестриктазы Hinfl и Ddel); Taql в интроне F в положении 72. Метод ПДРФ-анализа информативен только у 60-70% всех семей с гемофилией В [Сурин и др., 1994; Aseev M. et al., 1994 ]. Прямая диагностика гемофилии В включает амплификацию геномных фрагментов гена фактора IX с последующей детекцией ошибок комплементации методом mismatch detection и прямое секвенирование продуктов амплификации [Montadon A.J. et al., 1990].
Сравнительно небольшие размеры гена, присутствие белкового гено-продукта в сыворотке крови и наличие естественных биологических моделей способствовали быстрому прогрессу исследований по генотерапии гемофилии В, которая в настоящее время уже включена в программы клинических испытаний. Успешная трансдукция и коррекция генетического дефекта получены в опытах in vitro и in vivo на самых различных модельных системах [Gerrard A.J. et al., 1993; Culver K.W., 1994]. Так, при введении полноразмерной кДНК в составе ретровирусного вектора в первичные культуры кератиноцитов человека наблюдали экспрессию F9 и секрецию биологически активного фактора IX. После трансплантации этих трансду-цированных клеток nu/nu мышам человеческий фактор IX в небольшом количестве появлялся в кровотоке и сохранялся там в течение недели [Gerrard A.J. et al., 1993]. На собаках, страдающих гемофилией В, осуществлена трансдукция гепатоцитов in vivo путем прямой инфузии рекомби-нантного ретровирусного вектора в портальную вену. При этом наблюдали устойчивую экспрессию гена фактора IX в течение более 5 мес. и улучшение биохимических показателей свертываемости крови [Kay M.A. et al., 1993]. Имеется сообщение об успешной коррекции гемофилии В в Китае в 1992 г. Двум больным мальчикам в кожу спины трансплантировали культуру аутологичных фибробластов, предварительно трансдуциро-ванных ex vivo рекомбинантной кДНК гена FVIII. Несмотря на определенный скептицизм в оценке этого достижения со стороны специалистов, нет сомнения в том, что успешная генотерапия гемофилии В - событие самого ближайшего будущего.
