Особенно привлекательной в плане генной коррекции представляется возможность замены всего мутантного гена или его мутировавшей части (например, одного экзона) на нормальный аналог, что может быть достигнуто путем гомологичной рекомбинации. При этом в идеале можно ожидать не только длительную персистенцию введенного гена, но и сохранение нормальной экспрессии. С этой целью в конструкции, используемые для переноса ДНК, включают агенты, повышающие частоту гомологичного спаривания, например, бактериальную рекомбиназу. Показано, что в этих условиях частота гомологичной рекомбинации может превышать 2,5x10". Этого достаточно для того, чтобы с помощью ПЦР отобрать нужные клоны клеток. Для направленного введения фрагментов гена в строго определенные локусы генома недавно разработана система двойной замены, основанная на использовании HPRT-зависимых эмбриональных стволовых клеток и векторной конструкции, содержащей ген HPRT (гипоксантинфосфо-рибзилтрансферазы) и ген тимидинкиназы вируса герпеса (HSV). Двойная селекция трансформантов позволяет отобрать клетки, в которых произошла гомологичная рекомбинация. Такой подход нашел широкое применение при создании искусственных моделей наследственных болезней у человека. Однако в клинической практике он еще не используется.
ГЕНОТЕРАПИЯ МОНОГЕННЫХ НАСЛЕДСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Вопросы генотерапии наследственных заболеваний подробно рассмотрены в многочисленных обзорах [Дризе Н.И., 1994; Ledley F.D., 1987; Anderson W.F., 1992; Pyeritz R.E., 1992; Breakefield X.O., 1993; Lowenstein P.R., 1994; Kay M.A., Woo S.L.C., 1994; Brown M.S. et al., 1994; Crystal R.G., 1995] и достаточно полно суммированы в недавно опубликованной монографии [Culver K.W., 1994].
Уже через год после первого введения маркерного гена в организм человека была проведена успешная клеточная соматическая генотерапия.
